多肽合成

能否精確標記

多肽熒光標記基本都在多肽合成環節中，就已標記上，這時候幾乎所有活性基團完全被保護起來，所以肽的熒光標記是極其精確的定點標記，到最后再經過HPLC純化，提升被標記肽的純度至95%之上或98%之上。

比如說某段序列采用FAM標記

序列為：H2N-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9-COOH

序列里有3個氨基，都可以各自標記上FAM，如

標記在N端氨基上：FAM-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9

K6的側鏈氨基上：D1-A2-G3-L4-E5-K6(FAM)-G7-V8-K9

K9的側鏈氨基上：D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9(FAM)

而蛋白的熒光標記是非定點標記的，又被稱為任意標記。一般來說一個蛋白分子中會有許多個氨基，巰基，或者是其他基團。比如說熒光基團與蛋白分子的氨基相結合，這是因為氨基的數量不是唯一的，所以蛋白分子和熒光基團會存在很多種結合，最后結果一定是分子結構不單一的混合物。只不過在有些相關研究中，這個原因幾乎可以忽略不計，只需蛋白分子被標記上熒光基團就可以了，而不在意熒光基團標記在哪個位點。

熒光分子的使用量

在多肽熒光標記中，一般來說其熒光分子的使用量是蛋白標記使用量的幾十倍，乃至數百倍，比如說想取得5mg95%熒光標記的多肽，最少也要200mg或300mg熒光分子。

而蛋白熒光標記可采用等摩爾量的投料比，熒光分子的使用量也許只有幾毫克。

所以受熒光分子原材料的價錢限定，多肽熒光標記種類非常少，普遍的就FAM、FITC、TAMRA、RhodamineB等。

熒光標記過后的環境。

多肽熒光標記過后，一般來說可以采用濃度較高的三氟乙酸處理，處于強酸環境中，再通過HPLC純化。而蛋白熒光標記后的處理就溫和多了，可直接通過透析或HPLC純化。

寫到最后：

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